Методические указания "Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды" (далее - Методические указания) предназначены для лабораторий, выполняющих санитарно-микробиологические исследования воды при обеспечении государственного санитарно-эпидемиологического и производственного контроля качества воды: питьевого, хозяйственно-бытового водоснабжения, водных объектов рекреации, спорта и др.
Настоящие Методические указания являются первым опытом обобщения научных данных и практических рекомендаций международных и отечественных документов в этой области, а также результатов их использования в производственных условиях.
Авторы рассматривают представленный документ как один из этапов совершенствования организации внутреннего контроля в отношении качества микробиологических исследований.
Методические указания представляют собой свод отдельных методик и процедур контроля качества, выполняемых на различных этапах микробиологических исследований, и направлены на их унификацию в целях получения надежных и сопоставимых результатов анализа.
Данные Методические указания являются обязательными для выполнения лабораториями, аккредитованными (аттестованными) на проведение санитарно-микробиологических исследований воды. Руководство по качеству аккредитованной испытательной лаборатории должно включать или иметь ссылки на процедуры, описанные в Методических указаниях.
Документальное представление результатов выполнения методик и процедур, содержащихся в Методических указаниях, является неотъемлемой частью при подтверждении технической компетенции лабораторий, аккредитуемых в области микробиологических исследований воды.

МУ 2.1.4.1057-01. 2.1.4. Питьевая вода и водоснабжение населенных мест. Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды. Методические указания
1. Область применения
2. Нормативные ссылки
3. Термины и определения
4. Общие положения организации внутреннего контроля качества санитарно-микробиологического исследования воды
5. Контроль температурных режимов инкубации и хранения
5.1. Процедура контроля температуры в термостатах
5.2. Процедура контроля температуры в холодильниках
6. Контроль качества стерилизации и дезинфекции
6.1. Процедура контроля режимов паровой и суховоздушной стерилизации
6.1.1. Химический тестовый контроль
6.1.2. Термический контроль
6.1.3. Биологический контроль
6.2. Процедура контроля микробной обсемененности воздуха
6.3. Процедура исследования микробной обсемененности поверхностей
6.4. Оценка эффективности ультрафиолетового бактерицидного излучения
6.5. Процедура контроля стерильности фильтровальных установок
6.6. Процедура контроля обсемененности флаконов для отбора проб
7. Контроль качества дистиллированной воды
8. Требования к подготовке лабораторной посуды
9. Правила приготовления серийных разведений
10. Процедура ведения эталонных бактериальных культур
10.1. Общие положения
10.2. Ведение эталонных бактериальных культур без создания запаса эталонной культуры длительного хранения
10.2.1. Восстановление лиофилизированной эталонной культуры
10.2.2. Создание запасов рабочей культуры
10.2.3. Восполнение запасов рабочей культуры
10.2.4. Подготовка культуры для целевого использования в анализе
10.3. Оптимальный вариант ведения эталонных культур
10.3.1. Восстановление и контроль лиофилизированной культуры
10.3.2. Создание запасов эталонной культуры
10.3.3. Создание запасов рабочей культуры
10.3.4. Подготовка культуры для целевого использования
10.4. Контроль эталонных бактериальных культур
10.4.1. Оценка степени диссоциации культуры E.coli. M17-02
10.4.2. Контроль видовых свойств E.coli M17-02 и E.coli К12 + F Str-r
+ 10.4.3. Проверка чувствительности E.coli К12 F Str-r к фагу
+ 10.4.4. Проверка культуры E.coli К12 F Str-r на загрязненность фагом
10.4.5. Контроль видовых свойств Pseudomonas aeruginosa и Pseudomonas fluorescens
10.5. Культивирование, хранение и контроль эталонных культур бактериофагов
10.5.1. Восстановление лиофилизированной культуры
10.5.2. Создание запасов эталонной культуры фага и культур для целевого использования
10.5.3. Определение титра фага
11. Контроль питательных сред
11.1. Проверка документации и визуальный контроль питательных сред
11.2. Контроль условий и сроков хранения питательных сред
11.3. Контроль питательных сред на этапе приготовления
11.3.1. Оценка внешнего вида готовой среды
11.3.2. Измерение pH
11.3.3. Определение стерильности
11.4. Контроль биологических свойств питательных сред
11.4.1. Качественный контроль
11.4.2. Количественный контроль
11.4.2.1. Подготовительный этап
11.4.2.2. Методики посевов
11.4.2.3. Определение показателей "чувствительности" и "скорости роста"
11.4.2.4. Оценка дифференцирующих свойств среды Эндо и ее аналогов
11.4.2.5. Определение процента извлекаемости (% всхожести)
11.4.2.6. Оценка показателя ингибиции
11.4.3. Рекомендации по сравнительной оценке эффективности питательных сред с использованием фильтрующих материалов
11.4.3.1. Подготовительный этап
11.4.3.2. Посев методом мембранной фильтрации
11.4.3.3. Методика сравнительных исследований
11.5. Контроль на этапе использования питательных сред
11.5.1. Контроль температурного режима водяных бань, предназначенных для поддержания плотных питательных сред в расплавленном состоянии
11.5.2. Контроль времени нахождения питательной среды в расплавленном состоянии
11.5.3. Постановка положительного и отрицательного контролей
11.6. Ростовые характеристики ряда сред отечественного производства, применяемых в санитарно-бактериологическом анализе воды
12. Контроль эффективности фильтрующих материалов
12.1. Общие положения
12.2. Подготовительный этап
12.3. Методика исследования
12.3.1. Посев методом мембранной фильтрации
12.3.2. Посев прямым поверхностным методом
12.3.3. Расчет "процента извлекаемости" и оценка результатов
12.3.4. Рекомендации по сравнительной оценке эффективности различного фильтрующего материала
13. Особенности постановки тестов на этапе идентификации
13.1. Определение грам-принадлежности
13.2. Постановка оксидазного теста
13.3. Определение ферментации углеводов
Библиография
Приложение 1. Структура внутреннего контроля качества по объектам контроля
Приложение 2. Структура организации внутреннего контроля качества в лаборатории
Приложение 3. Лист контроля температурного режима
Приложение 4.
Приложение 5. Примерная форма регистрации результатов контроля обсемененности воздуха
Приложение 6. Примерная форма регистрации результатов контроля стерильности ФУ
Приложение 7.2. Схема ведения культур тестовых микроорганизмов (оптимальный вариант)
Приложение 8.1.
Приложение 8.2. Протокол количественного контроля питательных сред
Приложение 9. Протокол контроля фильтрующих материалов
Приложение 10. Оценка достоверности различия средних значений с использованием критерия Стьюдента-Фишера
Приложение 11. Перечень перспективного оборудования для проведения санитарно-микробиологического анализа воды, повышающего качество результатов анализа
Приложение 12. Тест на остатки ингибиторов на лабораторной посуде (Приложение к ISO 9998:1991 (E))

Российская ФедерацияМУ (Методические указания)

МУ 2.1.4.2899-11 Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды. Изменение 1 к МУ 2.1.4.1057-01

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Г.Г.Онищенко 12 июля 2011 г.

Внести следующие изменения в МУ 2.1.4.1057-01 :

• название таблицы "Протокол контроля мембранных фильтров" заменить на "Протокол контроля фильтрующих материалов", а также текст сноски к ней заменить на "*Заполняется при сравнении фильтрующих материалов разных серий одного производителя или фильтров разных производителей";
• табл. 7 изложить в редакции:

"7. Определение % удержания ФМ

Вид посева	Количество колоний на чашке или ФМ	Среднее количество колоний
Прямой поверхностный посев
Посев методом фильтрации на исследуемые ФМ (ИФМ)
Посев методом фильтрации на контрольные ФМ* (КФМ)
% удержаний ИФМ
% удержания КФМ
Достоверность различия по критерию t
Заключение о пригодности исследуемых ФМ

23. Первый абзац "Оценка достоверности различия средних значений с использованием критерия Стьюдента-Фишера" изложить в редакции: "Достоверность различия средних значений количества колоний, выросших на контрольной и исследуемой среде/фильтрующем материале, оценивают с использованием критерия Стьюдента для вероятности 95%".

24. В таблице "Перечень перспективного оборудования для проведения санитарно-микробиологического анализа воды, повышающего качество результатов анализа" текст строки 3 во второй графе "Наименование оборудования" начать со слов "Фильтрующие материалы современного уровня, характеризующиеся:" и далее по тексту.

ГОСУДАРСТВЕННАЯ СИСТЕМА САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО
НОРМИРОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

2.1.4. ПИТЬЕВАЯ ВОДА И ВОДОСНАБЖЕНИЕ
НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ

ОРГАНИЗАЦИЯ ВНУТРЕННЕГО КОНТРОЛЯ
КАЧЕСТВА САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕС КИХ
ИССЛЕДОВАНИЙ ВОДЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУ 2.1.4.1057-01

МИНЗДРАВ РОССИИ

Москва

1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральным центром Госсанэпиднадзора Минздрава России (Л .Г . Под унова , Н .С . Кр ивопалова , Р .С . Сорокина ),Аналитическим центром контроля качества воды ЗАО «Роса» (Г .П . К ашкарова , Е .Н . Ахап кина , С .Н . Т ымчук , А .И . Дород ников , А .В . Карташова , В .Е . Ларин ),Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (Г .М . Трухина ),Центром Госсанэпиднадзора в Тульской области (Т .А . Попова ).

2. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 6 июля 2001 г.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения. 3

3. Термины и определения. 5

4. Общие положения организации внутреннего контроля качества санитарно-микробиологического исследования воды.. 6

5. Контроль температурных режимов инкубации и хранения. 8

5.1. Процедура контроля температуры в термостатах. 8

5.2. Процедура контроля температуры в холодильниках. 9

6. Контроль качества стерилизации и дезинфекции. 9

6.1. Процедура контроля режимов паровой и суховоздушной стерилизации. 9

6.1.1. Химический тестовый контроль. 9

6.1.2. Термический контроль. 10

6.1.3. Биологический контроль. 11

6.2. Процедура контроля микробной обсемененности воздуха. 11

6.3. Процедура исследования микробной обсемененности поверхностей. 12

6.4. Оценка эффективности ультрафиолетового бактерицидного излучения. 14

6.5. Процедура контроля стерильности фильтровальных установок. 15

6.6. Процедура контроля обсемененности флаконов для отбора проб. 16

7. Контроль качества дистиллированной воды.. 18

8. Требования к подготовке лабораторной посуды.. 18

9. Правила приготовления серийных разведений. 21

10. Процедура ведения эталонных бактериальных культур. 23

10.1. Общие положения. 23

10.2. Ведение эталонных бактериальных культур без создания запаса эталонной культуры длительного хранения. 24

10.2.1. Восстановление лиофилизированной эталонной культуры.. 24

10.2.2. Создание запасов рабочей культуры.. 24

10.2.3. Восполнение запасов рабочей культуры.. 25

10.2.4. Подготовка культуры для целевого использования в анализе. 25

10.3. Оптимальный вариант ведения эталонных культур. 25

10.3.1. Восстановление и контроль лиофилизированной культуры.. 26

10.3.2. Создание запасов эталонной культуры.. 26

10.3.3. Создание запасов рабочей культуры.. 26

10.3.4. Подготовка культуры для целевого использования. 27

10.4. Контроль эталонных бактериальных культур. 27

10.4.1. Оценка степени диссоциации культуры Е. coli M17-02. 27

10.4.2. Контроль видовых свойств Е. coli M17-02 и Е. coli K12 F + Str-r27

10.4.3. Проверка чувствительности Е. coli K12 F + Str-r к фагу. 28

10.4.4. Проверка культуры Е. coli K12 F + Str-r на загрязненность фагом.. 28

10.4.5. Контроль видовых свойств Pseudomonas aeruginosa и Pseudomonas fluorescens. 28

10.5. Культивирование, хранение и контроль эталонных культур бактериофагов. 29

10.5.1. Восстановление лиофилизированной культуры.. 29

10.5.2. Создание запасов эталонной культуры фага и культур для целевого использования.29

10.5.3. Определение титра фага. 29

11. Контроль питательных сред. 30

11.1. Проверка документации и визуальный контроль питательных сред. 31

11.2. Контроль условий и сроков хранения питательных сред. 31

11.3. Контроль питательных сред на этапе приготовления. 32

11.3.1. Оценка внешнего вида готовой среды.. 32

11.3.2. Измерение рН.. 33

11.3.3. Определение стерильности. 33

11.4. Контроль биологических свойств питательных сред. 33

11.4.1. Качественный контроль. 34

11.4.2. Количественный контроль. 35

11.5. Контроль на этапе использования питательных сред. 41

11.5.1. Контроль температурного режима водяных бань, предназначенных для поддержания плотных питательных сред в расплавленном состоянии. 42

11.5.2. Контроль времени нахождения питательной среды в расплавленном состоянии. 42

11.5.3. Постановка положительного и отрицательного контролей. 42

11.6. Ростовые характеристики ряда сред отечественного производства, применяемых в санитарно-бактериологическом анализе воды.. 42

12. Контроль эффективности мембранных фильтров. 44

12.1. Общие положения. 44

12.2. Подготовительный этап. 44

12.3. Методика исследования. 45

12.3.1. Посев методом мембранной фильтрации. 45

12.3.2. Посев прямым поверхностным методом.. 46

12.3.3. Расчет «процента извлекаемости» и оценка результатов. 46

13. Особенности постановки тестов на этапе идентификации. 47

13.1. Определение Грам-принадлежности. 48

13.2. Постановка оксидазного теста. 48

13.3. Определение ферментации углеводов. 48

Библиография. 49

Приложение 1Структура внутреннего контроля качества по объектам контроля. 50

Приложение 2Структура организации внутреннего контроля качества в лаборатории. 51

Приложение 3Лист контроля температурного режима. 52

Приложение 4Журнал контроля работы стерилизаторов воздушного, парового (автоклава)52

Приложение 5Примерная форма регистрации результатов контроля обсемененности воздуха. 52

Приложение 6Примерная форма регистрации результатов контроля стерильности ФУ.. 53

Приложение 7.1Схема ведения культур тестовых микроорганизмов (допустимый вариант)53

Приложение 7.2Схема ведения культур тестовых микроорганизмов (оптимальный вариант)54

Приложение 7.3Схема оптимального варианта с примерным календарным планом манипуляций по ведению и контролю тестовых штаммов на 3 - 5 лет. 55

Приложение 8.1Журнал приготовления и контроля питательных сред. 55

Приложение 8.2Протокол количественного контроля питательных сред. 56

Приложение 9Протокол контроля мембранных фильтров. 57

Приложение 10Оценка достоверности различия средних значений с использованием критерия Стьюдента-Фишера. 58

Приложение 11 Перечень перспективного оборудования для проведения санитарно-микробиологического анализа воды, повышающего качество результатов анализа. 59

Приложение 12Тест на остатки ингибиторов на лабораторной посуде. 62

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный

врач Российской Федерации -

Первый заместитель Министра

здравоохранения Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

МУ 2.1.4.1057-01

2.1.4. ПИТЬЕВАЯ ВОДА И ВОДОСНАБЖЕНИЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ

Организация внутреннего контроля
качества са нитарно-микробиологических
исследований воды

Методические указания

1. Область применения

Методические указания «Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды» (далее - метод ические указания ) предназначены для лабораторий, выполняющих санитарно-микробиологические исследования воды при обеспечении государственного санитарно-эпидемиологического и производственного контроля качества воды: питьевого, хозяйственно-бытового водоснабжения, водных объектов рекреации, спорта и др.

Настоящие методические указания являются первым опытом обобщения научных данных и практических рекомендаций международных и отечественных документов в этой области, а также результатов их использования в производственных условиях.

Методические указания представляют собой свод отдельных методик и процедур контроля качества, выполняемых на различных этапах микробиологических исследований, и направлены на их унификацию в целях получения надежных и сопоставимых результатов анализа.

Данные методические указания являются обязательными для выполнения лабораториями, аккредитованными (аттестованными) на проведение санитарно-микробиологических исследований воды. Руководство по качеству аккредитованной испытательной лаборатории должно включать или иметь ссылки на процедуры, описанные в методических указаниях.

Документальное представление результатов выполнения методик и процедур, содержащихся в методических указаниях, является неотъемлемой частью при подтверждении технической компетенции лабораторий, аккредитуемых в области микробиологических исследований воды.

2. Нормативные ссылки

1.ГОСТ 18963-73 «Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа».

2. ГОСТ 26670-91 «Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов».

3. ГОСТ Р ISO/МЭК 17025-2000 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий».

4. ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96) «Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований».

5. XI Государственная Фармакопея СССР. - М., 1998.

6. Инструкции по микробиологическому контролю производства на предприятиях молочной промышленности. - М.,1987.

9. МУ 2.1.4.682-97. Методические указания по внедрению и применению санитарных правил и норм СанПиН 2.1.4.559-96 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества».

10. МУК 4.2.1018-01«Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды».

11. МУК 4.2.557-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского питания илечебного, их компонентов».

12. МУК 4.2.734-99 «Микробиологический мониторинг производственной среды».

13. ОСТ 42-21-2-85 «Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения. Методы, средства и режимы». - МЗ СССР, 1985.

14. Приказ № 720 Минздрава СССР от 31 июля 1978 г., п. 4 «Мероприятия, обеспечивающие асептические условия при посевах».

15. Приказ Минздрава РФ от 07.02.00 № 45 «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения Российской Федерации».

16. Руководство Министерства здравоохранения Российской Федерации Р 3.1.683-98 «Использование ультрафиолетового излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях». - М., 1998.

17. Руководство 2.2.755-99 «Гигиенические критерии оценки и классификации условий труда по показателям вредности и опасности факторов производственной среды, тяжести и напряженности трудового процесса».

18. Сборник инструкций по общим методам контроля стерильности, физико-химических свойств, пирогенности, на отсутствие контаминирующих агентов и токсичности медицинских иммунобиологических препаратов. Утв. приказом МЗ СССР № 31 от 13.01.83.

19. Система аккредитации испытательных лабораторий (центров) государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации. - М.,1997.

20. СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами». - М.,1999.

21. СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности». - М., 1996.

22. ФС 42-3377-97 «Питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ - агар)».

23. ФС 42-3378-97 «Питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ - бульон)».

24. ФС 42-3504-97 «Питательная среда для выделения энтеро-бактерий сухая (агар Эндо)».

25. ФС 42-3588-98 «Питательная среда для выделения сальмонелл сухая (висмут-сульфит агар)».

Использованные документы международного уровня указаны в разделе «Библиография».

3. Термины и определения

1. Бокс (бокс ированное помещение ) - изолированное помещение с тамбуром (предбоксником).

2. Бокс биологической безопасности (ламинарное укрытие ,ламинарный шкаф ) - конструкция, используемая для физической изоляции (удержания и контролируемого удаления из рабочей зоны) микроорганизмов с целью предотвращения возможности заражения персонала и контаминации воздуха рабочей зоны и окружающей среды.

3. Запас рабочей культуры - культура эталонного штамма в условиях временного хранения (полужидкий агар, 4- 8 °С).

4. Запас эталонной культуры - культура эталонного штамма в условиях длительного хранения (-70 °С, жидкий азот).

5. Культура для целевого использования - культура эталонного штамма, прошедшая не более 2 пассажей после высева со среды временного хранения (из запасов рабочей культуры), предназначенная для использования в анализе.

6. Лио филизированная культура - лиофильно высушенная культура эталонного штамма.

7. Патогенные биологические агенты (ПБА ) - патогенные для человека микроорганизмы (бактерии, вирусы, хламидии, риккетсии, простейшие, грибы, микоплазмы), генно-инженерно-модифицированные микроорганизмы, яды биологического происхождения (токсины), гельминты, а также материал, подозрительный на содержание перечисленных агентов (включая кровь, другие биологические жидкости и объекты окружающей среды).

8. Посевная - рабочее помещение, предназначенное для выполнения первого этапа санитарно-микробиологического исследования воды: концентрирования, разведения и/или посева в питательные среды.

9. Посев ная доза - объем конкретного разведения, содержащий необходимое для посева количество жизнеспособных клеток тестового микроорганизма.

10. Разбавитель - жидкость определенного состава, служащая для приготовления серийных разведений исследуемой воды или модельных бактериальных культур.

11. Субкультура - культура бактерий, полученная путем пассажа через полноценные питательные среды.

Методические указания МУ 2.1.4.2899-11
"Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды"
Изменение 1 к МУ 2.1.4.1057-01
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 12 июля 2011 г.)

Внести следующие изменения в МУ 2.1.4.1057-01:

1. В разделе 4 "Общие положения организации внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды":

Пункт 4 абзаца "Основные направления организации внутреннего контроля качества:" изложить в редакции:

"4. Контроль качества фильтрующих материалов (или далее - фильтров).".

В абзаце, начинающемся со слов "Описания процедур контроля соблюдения требований к условиям проведения анализа..." словосочетание "и мембранных фильтров" заменить на "и фильтрующих материалов".

2. В пункте 6.5 "Процедура контроля стерильности фильтровальных установок":

Третий абзац подраздела "Подготовительный этап" изложить в редакции:

"-стерильный фильтрующий материал для микробиологических целей (мембранные фильтры, аналитические трековые мембраны и другие фильтрующие материалы с диаметром пор не более 0,45 мкм и размером диска 35 или 47 мм), проверенной ранее партии (раздел 12).";

В первом абзаце подраздела "Методика контроля" после слов "С помощью стерильного пинцета помещают…" словосочетание "мембранный фильтр" заменить на "фильтрующий материал";

Третий абзац подраздела "Методика контроля изложить в редакции:

"Включают вакуум и отфильтровывают содержимое воронки. Вакуум отключают, снимают фильтровальную воронку и стерильным пинцетом переносят фильтрующий материал с основания на чашку со средой. Между фильтрующим материалом и поверхностью агара не должно быть пузырьков воздуха. Чашки с посевами переворачивают и инкубируют в термостате при (37 +/- 1)°C в течение (24 +/- 2) часов.".

3. В пункте 6.6 "Процедура контроля обсемененности флаконов для отбора проб":

Пятый абзац подраздела "Подготовительный этап" изложить в редакции:

"- стерильный фильтрующий материал для микробиологических целей (мембранные фильтры, аналитические трековые мембраны и другие фильтрующие материалы с диаметром пор не более 0,45 мкм и размером диска 35 или 47 мм), проверенной ранее партии (раздел 12).";

В седьмом абзаце подраздела "Методика контроля" после слов "100 мл стерильной водопроводной воды (отрицательный контроль), затем через другой…" словосочетание "мембранный фильтр" заменить на "фильтрующий материал".

4. Четвертый абзац раздела 9 "Правила приготовления серийных разведений" изложить в редакции:

"- для постановки исследований, требующих количественного учета используемых модельных микроорганизмов, например при количественной оценке качества питательных сред, фильтрующих материалов и т.д.".

5. Пункт 1 одиннадцатого абзаца пункта 10.1 "Общие положения" изложить в редакции:

"1. E.coli M17-02 как положительный контроль биохимических тестов и отрицательный контроль реактива на оксидазу; для контроля фильтрующих материалов; для контроля качества питательных сред по биологическим показателям.".

6. Название пункта 11.4.3 изложить в редакции:

"11.4.3. Рекомендации по сравнительной оценке эффективности питательных сред с использованием фильтрующих материалов".

Первый абзац изложить в редакции:

"Основным методом концентрирования в санитарно-бактериологических исследованиях воды является фильтрование через фильтрующий материал. Введение дополнительного фактора, фильтрующего материала, в систему "микроорганизм-питательная среда" может оказать влияние на показатели роста микроорганизмов и биологические свойства среды.";

Во втором абзаце после слов "обеспечивающие своим составом оптимальные условия роста микроорганизмов при использовании…" словосочетание "мембранных фильтров" заменить на "фильтрующих материалов";

В четвертом абзаце после слов "оценка качества среды в комплексе с используемыми в анализе…" словосочетание "мембранными фильтрами" заменить на "фильтрующими материалами".

8. В пункте 11.4.3.1 "Подготовительный этап" подразделы "Мембранные фильтры" и "Питательные среды" изложить в редакции:

"Фильтрующие материалы

Процент извлекаемости используемых фильтрующих материалов должен составлять не менее 80% на полноценной неселективной среде. Фильтрующие материалы должны быть стерильными.

Питательные среды

Питательные среды для посева фильтрующих материалов не подсушиваются, но на поверхности разлитых в чашки сред не должно быть видимой влаги.".

9. В пункте 11.4.3.2 "Посев методом мембранной фильтрации":

Во втором абзаце после слов "Стерильным пинцетом помещают…" словосочетание "мембранный фильтр" заменить на "фильтрующий материал";

"Вакуум отключают, снимают фильтровальную воронку и стерильным пинцетом переносят фильтрующий материал с основания на питательную среду. Между фильтрующим материалом и поверхностью агара не должно быть пузырьков воздуха. Чашки с посевами переворачивают и инкубируют в термостате при (37 +/- 1)°C в течение 18 - 24 часов.".

10. В пункте 11.4.3.3 "Методика сравнительных исследований":

Второй и третий абзацы изложить в редакции:

"На втором этапе отобранные среды оценивают по показателю "процент извлекаемости" с использованием двух способов посевов: прямого (по п. 11.4.2.5) и методом с использованием фильтрующих материалов. Для каждой исследуемой среды и варианта посева должно быть выполнено не менее 5 повторов. Контролями служат прямой посев (контроль N 1) и посев методом с использованием фильтрующих материалов (контроль N 2) на неселективную среду.

При необходимости могут быть проведены параллельные дополнительные исследования с инокулятом природной воды. Инокуляты природной воды с внесенными тестовыми микроорганизмами (или без них) засевают методом с использованием фильтрующих материалов на исследуемые селективные среды.";

Второй абзац подраздела "Учет результатов" изложить в редакции:

"Согласно разделу 12 подтверждают качество используемых в эксперименте фильтрующих материалов путем расчета "процента извлекаемости" для фильтрующих материалов по средним результатам контрольных посевов (прямого N 1 и мембранного N 2) на неселективный агар.".

11. Название раздела 12 изложить в редакции:

"12. Контроль эффективности фильтрующих материалов".

12. Пункт 12.1 "Общие положения" изложить в редакции:

"В практике лабораторий, проводящих санитарно-бактериологический контроль воды, используются фильтрующие материалы диаметром 47 или 35 мм и средним размером пор 0,45 мкм.

Фильтрующие материалы применяются:

В анализе на общие и термотолерантные колиформные микроорганизмы;

В анализе на споры сульфитредуцирующих клостридий.

Качество используемых фильтрующих материалов может оказать существенное влияние на результаты анализа. При этом качество фильтрующих материалов одного производителя может меняться от партии к партии. При поступлении каждой новой партии фильтров, а также при необходимости принятия решения о возможности продления сроков годности осуществляется контроль эффективности фильтрующих материалов.

При наличии в поступившей партии нескольких серий фильтров контроль проводится для каждой серии.

Фильтрующие материалы, допущенные к проведению анализа, используются однократно. Повторное применение фильтрующих материалов запрещается.

Принцип метода

Эффективность фильтрующих материалов определяется путем сравнения числа колоний микроорганизмов, выросших на полноценной питательной среде в результате прямого поверхностного посева суспензии культуры контрольного микроорганизма, и числа колоний, выросших на этой же среде в результате посева способом мембранной фильтрации.

Оценка эффективности фильтрующих материалов осуществляется по показателю "процент извлекаемости". Фильтрующие материалы считаются пригодными, если при посеве способом мембранной фильтрации вырастает не менее 80% от числа колоний, полученных при прямом посеве.

Отбор фильтров для контрольного исследования должен проводиться "слепым" методом, т.е. фильтры для контроля необходимо отбирать произвольно из разных упаковок анализируемой партии.".

13. В пункте 12.2 "Подготовительный этап" подраздел "Мембранные фильтры" изложить в редакции:

"Фильтрующий материал

Исследуемый фильтрующий материал должен быть стерильным.".

14. Первый абзац пункта 12.3 "Методика исследования" изложить в редакции:

"Выполняются параллельные посевы суспензии чистой культуры тестового микроорганизма способом мембранной фильтрации через исследуемый фильтрующий материал и прямым (поверхностным) способом.".

15. В пункте 12.3.1 "Посев методом мембранной фильтрации":

Во втором абзаце после слов "С помощью стерильного пинцета помещают…" словосочетание "мембранный фильтр" заменить на "фильтрующий материал";

В третьем абзаце после слов "Вакуум отключают, снимают фильтровальную воронку и стерильным пинцетом…" изложить текст в редакции: "…фильтрующий материал переносят на чашку с питательной средой (п. 11.2). Между фильтрующим материалом и поверхностью агара не должно быть пузырьков воздуха. Посевы инкубируют в термостате при (37 +/- 1)°C в течение 18 - 24 часов.".

16. Пункт 12.3.3 "Расчет "процента извлекаемости" и оценка результатов" изложить в редакции:

"Для оценки исследуемого фильтрующего материала вычисляют процент извлекаемости (удержания) фильтрующих материалов по формуле:

И% - процент извлекаемости (удержания);

СЧмф - среднее арифметическое значение количества колоний, выросших на фильтрах при посеве методом мембранной фильтрации;

СЧч - среднее арифметическое значение количества колоний, выросших на чашках при прямом поверхностном посеве.

Пригодными считаются фильтрующие материалы, имеющие процент извлекаемости (удержания) *.

В случае получения менее 80% извлекаемости тестового микроорганизма исследования следует повторить с удвоенным количеством повторов (не менее 10), с суммарным учетом по контрольному прямому посеву не менее 400 КОЕ.".

17. Название пункта 12.3.4 изложить в редакции:

"12.3.4. Рекомендации по сравнительной оценке эффективности различного фильтрующего материала".

В первом абзаце после слов "поставляемых одним производителем, а также…" словосочетание "мембранных фильтров" заменить на "фильтрующих материалов";

Четвертый абзац изложить в редакции:

"- посевы методом с использованием фильтрующих материалов с каждым видом (серией) фильтров по п. 12.3.1;";

В седьмом абзаце после слов "осуществляется путем оценки достоверности различия средних значений количества колоний, выросших на…" словосочетание "мембранных фильтрах" заменить на "фильтрующих материалах";

Второй абзац подраздела "Оценка результатов" изложить в редакции:

"При сравнении фильтрующих материалов разных марок, типов или разных производителей выбирают фильтрующие материалы, среднее число колоний которых превышает аналогичный показатель для других фильтров с достоверностью 95%.".

19. Во втором абзаце пункта 13.2 "Постановка оксидазного теста" после слов "Следует иметь в виду, что при постановке оксидазного теста путем наложения…" словосочетание "мембранного фильтра" заменить на "фильтрующего материала".

20. В схеме "Структура внутреннего контроля качества по объектам контроля", представленной в приложении 1, текст в ячейке "Мембранные фильтры. Контроль эффективности" изложить в редакции: "Фильтрующий материал. Контроль эффективности".

21. В таблице "Структура организации внутреннего контроля качества в лаборатории" приложения 2 текст во второй графе "Область контроля" строки 2.5 изложить в редакции: "Контроль фильтрующих материалов".

22. В приложении 9:

Название таблицы "Протокол контроля мембранных фильтров" заменить на

"Протокол контроля фильтрующих материалов",

а также текст сноски к ней заменить на

"* Заполняется при сравнении фильтрующих материалов разных серий одного производителя или фильтров разных производителей.";

Таблицу 7 изложить в редакции;

"7. Определение % удержания ФМ

Вид посева	Кол-во колоний на чашке или ФМ					Среднее кол-во колоний
Прямой поверхностный посев
Посев методом фильтрации на исследуемые ФМ (ИФМ)
Посев методом фильтрации на контрольные ФМ * (КФМ)
% удержаний ИФМ
% удержания КФМ
Достоверность различия по критерию *
Заключение о пригодности исследуемых ФМ

______________________________

* Заполняется при сравнении фильтрующих материалов разных серий одного производителя или фильтров разных производителей.".

23. Первый абзац приложения 10 "Оценка достоверность различия средних значений с использованием критерия Стьюдента-Фишера" изложить в редакции:

"Достоверность различия средних значений количества колоний, выросших на контрольной и исследуемой среде/фильтрующем материале, оценивают с использованием критерия Стьюдента для вероятности 95%.".

24. В таблице "Перечень перспективного оборудования для проведения санитарно-микробиологического анализа воды, повышающего качество результатов анализа" приложения 11 текст во второй графе "Наименование оборудования" строки 3 начать со слов "Фильтрующие материалы современного уровня, характеризующиеся:" и далее по тексту.

Методические указания МУ 2.1.4.2899-11 "Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды" Изменение 1 к МУ 2.1.4.1057-01 (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 12 июля 2011 г.)

Дата введения: с момента утверждения

Обзор документа

Скорректированы методические указания по организации внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды. Они предназначены для лабораторий, аккредитованных на проведение указанных работ. Указания применяются при обеспечении санитарно-эпидемиологического и производственного контроля качества воды: питьевого, хозяйственно-бытового водоснабжения, водных объектов рекреации, спорта и др.

Изменения касаются контроля качества стерилизации и дезинфекции, правил приготовления серийных разведений, процедуры ведения эталонных бактериальных культур. Также уточнены порядок контроля питательных сред и эффективности фильтрующих материалов, особенности постановки тестов на этапе идентификации.

Изменения вводятся в действие с момента утверждения.